闲话不多说，咱们直奔主题！其实整个过程与大鼠内眦静脉采血十分相似，但要求术者更加细心的操作。
20g 12W左右 C57BL/6 雌性小鼠，接受每周一次右眼内眦静脉采血，这已经是它第四次接受穿刺采血了。
10%水合氯醛0.05-0.07毫升腹腔注射，约5分钟后，小鼠达到理想的麻醉状态，拟行穿刺。（麻醉剂量应根据各自实验室具体情况而定）
穿刺前，碘伏消毒眼周皮毛，左手固定小鼠，右手穿刺。固定小鼠的方式如照片所示：应让眼球凸出，这样才能保证在穿刺时不会使小鼠致盲，同时达到压迫阻止静脉回流的目的。
事先准备好毛细玻璃管（用手折断，我个人习惯用4厘米长左右的），玻璃管平端先沿着鼻侧眼角慢慢滑动至眼球正下方的眼皮内，此时左手微微顺时针旋转，使小鼠头部相对位置微向右下偏转，即相当于玻璃管刺入时是对着口腔方向的，这样做可进一步避免小鼠失明。如上操作时，右手及毛细管保持不动。当小鼠头部位置调整妥当时，毛细玻璃管刺入，这个动作应稳且迅速。一般情况下，即会有血液流出，此时可快速拧搓毛细管，进一步破坏内眦静脉丛，加快出血速度。
如出血速度满意，最好计数出血小滴数目，从我个人经验来讲，20g左右的小鼠16-20小滴血的出血量（0.4-0.5毫升）不会危及小鼠生命。出血时右手提拉小鼠尾部，使得小鼠身体呈头低臀高位，促进躯干循环血液回流入心脏加大出血。
采血完毕，拔除毛细管，清洁棉球压迫眼部片刻，碘伏消毒眼部。然后可给予5%葡萄糖注射液0.6毫升腹腔注射，这样可提高穿刺失血后小鼠的存活率。此剂量麻醉的小鼠一般在麻醉2小时后可清醒，3小时后基本达到麻醉前的状态。可喂食一定量的瓜子，加强动物营养，体现动物福利的伦理原则。
将EP管室温放置2小时左右，3800rpm 10min 离心，0.4-0.5ml 血液可分离出血清150-250微升，适用于同一样本多次采血，拟使用ELISA或敏感的化学发光法检测的指标。
是否麻醉？
有的同仁表示，小鼠不麻醉也可采血。我个人认为小鼠易应激，若采血操作不当，可能造成小鼠死亡。我个人在练习的过程中也确实体会到，不麻醉确实会出现小鼠死亡，而麻醉+手法熟练，可保证小鼠的存活。
对野生型品系的小鼠，内眦采血操作对它们的影响不大。但对于基因敲除鼠或免疫缺陷鼠来说，行此操作需谨慎。
如能用乙醚麻醉，效果更佳，但应避免小鼠暴露于乙醚蒸气时间过长而死亡。
心得：
对我来说，大鼠内眦采血已不在话下。当我知道我的课题可能需要用到小鼠内眦采血时，我是有畏难情绪的。唯一的途径就是多练习，从每一次的操作过程中细心琢磨。要练手！也要准备出用来练手的实验动物，最好与你要真正进行操作时的小鼠是同一品系的。操作训练的那段时间，为我牺牲的小鼠不下20只，虽然它们不懂，也看不到，但在此表示敬意和感谢。也请朋友们遵照动物应享有的福利原则，善待实验动物。我们一起加油！
